Авторы: Шилкин А.Г. доцент, кандидат наук, Ротанов Д.А. кандидат наук, Павлова Т.Н. ветеринарный врач, Новикова К.А. ветеринарный врач.
«Центр ветеринарной офтальмологии доктора Шилкина А.Г.» г.Москва.
В последние несколько лет в гуманитарной и ветеринарной медицине наблюдается взрывной рост интереса к новым клеточным технологиям. В ветеринарии этот интерес особенно ярко проявляется в быстром развитии различных методов лечения животных стволовыми клетками. Однако внедрение стволовых клеток в ветеринарную медицину имеет ряд серьёзных сдерживающих факторов, таких как:
Дороговизна метода
Непредсказуемость результатов
Длительность времени выращивания аутологичного материала
Отсутствие маркёров стволовых клеток для животных.
В настоящее время в гуманитарной медицине появился новый эффективный метод клеточной терапии – лечение плазмой, обогащенной тромбоцитами. Данная методика является безопасной (берётся собственная кровь), физиологичной, простой и она гораздо дешевле, чем стволовые клетки. Буквально за несколько лет, плазма обогащённая тромбоцитами стала широко применяться не только во многих областях медицины, но и быстро осваивается ветеринарными клиниками США.
Плазма обогащённая тромбоцитами широко применяется в гуманитарной косметологии, стоматологии, отоларингологии, пластической и челюстно-лицевой хирургии. В гуманитарной офтальмологии метод широкой распространенности не получил и используется единичными зарубежными и отечественными специалистами. В российской ветеринарной офтальмологии этот метод лечения ранее никем не описан. В зарубежной литературе присутствуют только ссылки на применение этого метода ветеринарными офтальмологами из США. С самими научными работами нам ознакомится так и не удалось.
Целью нашего исследования являлись: разработка методики лечения глазных заболеваний у собак и кошек с помощью плазмы обогащенной тромбоцитами.
Материалы и методы исследования. С помощью методики плазмы обогащённой тромбоцитами, нами было пролечено 28 глаз животных – 25 собак и 3 кошки с различными дистрофическими заболеваниями глаз:
- Собаки с синдромом сухого глаза – 15 глаз. Заболевание варьировано от начальной до терминальной стадии.
- Собаки с хроническими незаживающими эрозиями роговицы – 7 глаз.
- Терапия проводилась животным после операций по пересадке роговицы – 6 глаз (3 собаки и 3 кошки).
Возраст животных колебался от 6 месяцев до 15 лет.
Методы исследования. Передний отрезок глаза исследовали с помощью налобного биомикроскопа Heine (Германия) и щелевой лампы Shin Nippon (Япония).
Внутриглазное давление измерялось Tonovet и тонометром Маклакова.
Количество слезопродукции определялось тестом Ширмера.
Величина роговичной эрозии контрастировалась флюоресцином.
Состояние сетчатки и зрительного нерва визуализировались с помощью прямого и обратного бинокулярного офтальмоскопов.
Результаты собственных исследований.
Суть метода плазмы обогащённой тромбоцитами.
Плазма обогащённая тромбоцитами представляет собой плазму содержащую не менее 1 млн. тромбоцитов на 1 мл плазмы. То есть содержание тромбоцитов в этой плазме превышает физиологическую норму в 5 раз. Такая высокая концентрация тромбоцитов и обеспечивает их стимулирующий эффект за счёт запуска цитокиновых реакций и выделения множества факторов роста. При меньшей концентрации стимулирующий эффект тромбоцитов отсутствует.
Механизм действия метода.
В богатой тромбоцитами плазме находятся все основные 6 факторов роста:
Тромбоцитарный фактор роста PDGF
Трансформирующий фактор роста TGF
Инсулиноподобный фактор роста IGF
Фактор роста фибробластов FGF
Фактор роста эндотелия VEGF
Эпидермальный фактор роста
Эти цитокины являются ведущими в процессах клеточной дифференцировки, пролиферации и регенерации. При введении плазмы обогащённой факторами роста в патологический очаг происходит ускоренное восстановление повреждённых тканей, уменьшение воспалительных процессов и улучшение трофики непосредственно в очаге поражения.
Методика забора крови и центрифугирования.
Для лечения заболеваний в ветеринарной офтальмологии, нами была разработана методика применения плазмы обогащённой тромбоцитами. Суть её состоит в следующем. У животного производится забор крови из периферических вен в специальные пробирки для плазмолифтинга. Эти вакуумные пробирки созданы и запатентованы профессором P.P.Ахмеровым. Они содержат разделительный гель и имеют высокий уровень очистки плазмы от эритроцитарного сгустка. Пробирки с кровью устанавливаются в центрифугу ЕВА 20 (Hettich – Германия), которая разработана специально для быстрого разделения крови на фракции и рекомендуется всеми ведущими специалистами. Пробирки центрифугировались в течение 10 минут со скоростью 3,5 тыс. оборотов в минуту. После вращения кровь разделялась на 3 основные составляющие:
1. Верхний слой – бедная тромбоцитами плазма
2. Средний – самый тонкий слой – богатая тромбоцитами плазма
3. Нижний слой, находящийся под гелем – эритроциты.
Богатая тромбоцитами плазма извлекалась из пробирки с помощью шприцевой иглы. Затем после местной анестезии животному проводилась субконъюнктивальная инъекция чистой плазмы в верхний сегмент конъюнктивы. Количество вводимой плазмы составляло 0,5-1 мл. Так же плазма закапывалась в конъюнктивальную полость от 3 до 6 раз в день, сроком на 3-10 дней, в зависимости от патологии. При инстилляциях для разрыва тромбоцитов и освобождения факторов роста использовалось небольшое количество хлористого кальция. Нами было выявлено следующее: субконъюнктивальные инъекции плазмы полностью безопасны. Они не вызывают токсических, аллергических или местно-раздражающих реакций со стороны глаза и организма в целом.
Инстилляция в полость глаза плазмы с добавлением хлористого кальция представлялась нам не безопасной и вызывала определённые опасения. Однако оказалось, что при незначительном содержании хлористого кальция в плазме (до 0,1 мл на 1 мл плазмы) он не наносит никаких побочных действий и не имеет местных токсических, аллергических и раздражающих реакций, даже при длительном применении.
Таким образом, метод применения плазмы обогащённой тромбоцитами в ветеринарной офтальмологии показал свою физиологичность, безопасность, отсутствие токсических реакций и местно-аллергических осложнений. Его клиническая эффективность и обсуждение результатов лечения описаны ниже в следующей статье.
